首页 期刊 淡水渔业 翘嘴鳜铜锌超氧化物歧化酶重组蛋白表达、纯化及特性分析 【正文】

翘嘴鳜铜锌超氧化物歧化酶重组蛋白表达、纯化及特性分析

作者:肖俊; 许亮清; 胡向萍; 程周玉; 胡宝庆; 简少卿; 阳钢; 文春根 南昌大学生命科学学院; 南昌330031; 南昌市科学院畜牧水产研究所; 南昌330038
铜锌超氧化物歧化酶   原核表达   蛋白特性  

摘要:超氧化物歧化酶(SOD)是清除生物体内超氧阴离子自由基的一种重要抗氧化酶。根据翘嘴鳜(Siniperca chuatsi)Cu/Zn-SOD基因序列(Gen Bank登录号:KJ558392.1)设计表达引物,扩增获得截去信号肽后的一段460 bp的序列,序列经过鉴定后,构建了重组表达质粒p ET-30a+Sc Cu/Zn-SOD,并将该质粒转入到BL21(DE3)中,用IPTG诱导进行表达。经过优化表达条件得到可溶的Sc Cu/Zn-SOD重组蛋白(rScCu/Zn-SOD),纯化重组蛋白后测定rScCu/Zn-SOD的浓度和酶活性。结果发现在20℃和37℃条件下均能够诱导Sc Cu/ZnSOD的表达。37℃时重组蛋白主要以包涵体形式存在。降低诱导温度和补充Cu(2+)/Zn(2+)可提高rScCu/Zn-SOD的表达量。在20℃、0.5 mmol/L IPTG条件下,添加0.5 mmol/L CuSO4和0.1 mmol/L ZnCl2于培养基中,重组蛋白的表达量明显升高。纯化后的重组蛋白浓度为0.14 mg/m L,酶活力为108.5 U/mg。rScCu/Zn-SOD最适温度为37℃,最适pH为7.0,可耐受5%浓度的SDS蛋白质变性剂。

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